thp-1为啥养着贴壁了?
thp-1养贴壁了还能拯救吗?
thp-1细胞很多贴壁的怎么处理啊？
thp-1复苏后，养不起来咋办？
thp-1聚团正常吗？
thp-1已经养了一周了，还是大量聚团，数量还是没那么多，能扩瓶吗？
最近好多小伙伴咨询 thp-1 细胞培养各种难题，问的最多的还是贴壁问题。通过经验总结和资料查询，今天给大家出一份培养攻略，希望帮到大家。
先做一个简短介绍：thp-1 细胞系最初来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，属于悬浮细胞，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。
表1 thp-1（人单核细胞白血病细胞）细胞基本信息
形态
淋巴细胞样
生长特性
悬浮
营养体系
89% rpmi1640基础培养基（abs9484）+10% 胎牛血清优级（abs972）+ 1%双抗（abs9244）+0.1% mm 2- mercaptoethanol（abs9592）
图1 1640基础培养基(abs9484)和胎牛血清(特级)(abs972)
图2 thp-1（人单核细胞白血病细胞）
thp-1单核细胞正常形态为悬浮的体积较小、透亮的圆形细胞，少数聚团成葡萄状，粒粒饱满，轮廓清晰（如图3）。该细胞在偏酸性环境中，生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是比较适合细胞生长的，此时补液或半换液即可；开启后的1640培养基，长期放置ph会偏高，建议开封后一周内使用完毕。该细胞对血清要求高，血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
图3 状态良好的thp-1（人单核细胞白血病细胞）
首先，我们要讨论的是thp-1贴壁问题。thp-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况（如图4），不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。但如果当贴壁细胞比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，这时候就需要排查培养箱温度及co2浓度、培养基成分，以及培养器皿是否异常。可用非tc处理过的培养瓶，不利于细胞贴壁。
图4 部分贴壁的thp-1（人单核细胞白血病细胞）
然后我们要讨论的是thp-1聚团问题（如图5所示）。thp-1细胞在密度较稀时，有少量细胞聚团属于正常现象，不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，细胞会自然分散开。当细胞密度高时，聚团细胞比例高于30%时，并且细胞团呈糜烂状，细胞之间界限不清，胞体质膜有溃烂感，这种情况下的细胞聚团是异常的。若对细胞没有做过任何实验处理，可优先排查营养体系，比如更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。
图5 严重聚团的thp-1（人单核细胞白血病细胞）
最后我们要讨论的是关于thp-1复苏不起来怎么办？（如图6所示）该细胞对冻存密度有依赖，冻存密度建议5*106-107/ml；同时复苏密度也有依赖性，建议不低于3*106/ml。当细胞传过几次代，状态较好时，传代密度维持在5*105/ml-106/ml为宜，超过2*106/ml则需要传代。如有细胞碎片，待细胞密度增大后通过低速离心去除。
图6 复苏状态很差的thp-1（人单核细胞白血病细胞）
本期讲解就到这里了，如有细胞培养问题，欢迎扫码加入我们微信群交流。
注：图源网络和客户，仅供参考学习用
表2 细胞培养类产品推荐
货号
品名
规格
abs981
胎牛血清（特级）
500ml
abs972
胎牛血清（优级）
500ml
abs974
胎牛血清（标准级）
500ml
abs9483
高糖dmem培养基
500ml
abs9484
rpmi-1640培养基
500ml
abs9505
mem培养基
500ml
abs9506
α-mem培养基
500ml
abs9554
ham's f-12培养基
500ml
abs9563
ham's f-12k培养基
500ml
abs9561
dmem/f-12培养基
500ml
abs962
pbs缓冲液
500ml
abs970
d-pbs缓冲液（不含 ca2+ mg2+）
500ml
abs971
d-pbs缓冲液（含 ca2+ mg2+)
500ml
abs9257
hanks平衡盐溶液（不含 ca2+ mg2+)
500ml
abs9258
hanks平衡盐溶液（含 ca2+ mg2+)
500ml
abs47014938
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%） ，含酚红
100ml
abs47047375
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%），不含酚红
100ml
abs9479
无dmso无血清细胞冻存液
100ml
abs9417
无血清细胞冻存液
100ml
abs9473
细胞冻存液（含血清）
100ml
abs9474
组织保存液
100ml
abs9480
组织冻存试剂盒
30ml
abs9486
模具
1个/套
abs9487
小刀
5片/包
abs9481
组织复苏试剂盒
50ml
abs42020125
卡那霉素b硫酸盐
250mg
abs42018967
硫酸庆大霉素溶液
10ml
abs9244
青链双抗
100ml
abs9245
青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液
100ml
abs42013298
两性霉素b
1g
abs44071148
制霉菌素
1g
abs9246
青霉素-链霉素-两性霉素b混合溶液
100ml
abs9252
支原体检测试剂盒
100t
abs9375
支原体清除试剂
200ul×5
abs9376
支原体预防
500ul×4
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环丙沙星盐酸盐
500mg
abs9374
水盘抑菌剂
20ml
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水浴锅抑菌剂
100ml
abs9372
培养箱除菌剂
480ml
abs9373
细胞房除菌剂
480ml